专治各种"测不准",凡知医学Qubit dsDNA定量试剂申请出战!

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凡凡,我测的NGS样品浓度满足测序公司的送样,为什么反馈浓度低,把样品给我退回了呢?
亲,你是用什么方法测定的文库浓度?
当然是用NanoDrop测定的了。
那可能是因为NanoDrop无法对核酸进行精确定量的,测量不准,被退回。NGS文库浓度的准确定量需要用Qubit仪器结合核酸染料测。
原来是这样啊!我这就去学习一下这2种方法的区别。
 

 

 

紫外光吸收法是通过测定dsDNA在260nm处的吸光度来计算DNA的浓度,速度快,成本低,但容易受到样本中RNA、蛋白质、多糖等其它杂质的影响,不能满足精确定量的要求。

 

Qubit荧光染料法利用染料与dsDNA特异结合后发出荧光,从而对dsDNA精确定量,受其他物质的影响小,操作简单,灵敏度高,是NGS文库浓度测定的首选方法。

 

 

 
 
 
核酸定量作为分子生物学研究的基础环节,其质量与浓度精准度直接影响下游实验的关键性能指标,尤其对NGS、qPCR、RT-PCR等高精度应用领域的数据可靠性和实验成功率至关重要。但常规核酸定量方法在应对日益增长的需求时面临诸多挑战:
01
效率低下

传统核酸定量方法如紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳等,手工操作步骤多,检测96个样本通常需要30分钟以上,难以满足高通量检测需求。

02
污染物影响

样本中存在ssDNA、RNA、蛋白质、盐类等杂质会影响dsDNA的定量。例如,Qubit试剂盒可以在一定程度上耐受杂质,但过高的杂质浓度仍会影响定量准确性。

03
数据可靠性问题

低浓度样本的定量误差较大。部分传统仪器(如普通紫外分光光度计)对低浓度核酸的检测能力有限,可能导致结果低估;

为操作引入误差,比如移液不准、混不匀等;

外界因素,比如实验室温度、不同仪器的性能差异等,均会影响其准确性和稳定性。

 

低浓度定量不抓狂

凡知医学Qubit dsDNA试剂盒

助你轻松搞定这些难题

 

凡知医学

FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒

货号:FG4101

规格:500 rxns

FireQubit dsDNA HS Assay Kit是一种简便快速、灵敏、准确度高的双链DNA(dsDNA) 荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含荧光检测试剂、标准品和缓冲液,对dsDNA有高度选择性,RNA干扰小,对于dsDNA样本在0.1-100ng之间有良好的线性关系,相比于传统的紫外检测(A260)方法,可更精确地对DNA进行定量,免除其它物质的干扰,可准确测定dsDNA浓度,提高实验的准确性。

本试剂盒操作简单,可使用荧光酶标仪或Qubit仪器进行检测。针对酶标仪高通量检测模式,特别包含了5个点的标准品,能使定量结果更加准确。

 

01
产品应用
 
 
 

 

可以对浓度为0.1ng/µL-100ng/µL的dsDNA样品进行精确定量。

 

02
产品优势
 
 
 

 

✅灵敏度高:可以对浓度为0.1ng/µL-100ng/µLdsDNA样品进行精确定量。
✅特异性强:只结合dsDNA,特异性强,不受RNA的影响,并且对一些常规的污染物,如盐、游离的核苷酸、蛋白质、溶剂、去污剂等都具有极好的耐受性。
✅耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR 扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
✅操作简便性:操作简单,将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液,然后加入待测dsDNA 样品,通过Qubit®荧光仪进行检测,此操作在室温下即可进行。

✅定量更精确:在ssDNA、RNA和单体核苷酸存在的条件下,可以选择性地检测低至0.1ng/µL的dsDNA。

 

03
应用案例
 
 
 

 

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图1:测试结果

 

针对9个经过标准品系列梯度稀释的不同浓度(10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、0.0781、0 ng/ μL)的dsDNA样本用FireQubit试剂进行检测,结果如图所示:dsDNA 样本在0-100ng区间具有良好的线性关系,并且样本重复性较好。

 

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图2:污染物对dsDNA定量检测试剂盒的影响

 

如图所示:将凡知FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒应用于存在高浓度污染物的样本中定量dsDNA,结果表现优异,抗污染能力强

 

 
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2025年6月6日 09:21
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