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解决方案 | 高质量RNA来源:凡知医学全血RNA获取指南
临床实践中最容易获得的样本是什么?
全血样本
全血提取RNA时容易失败,怎么办?
提取别急,凡知给您想办法!
血液样本检测的重要性和意义
血液是唯一与所有器官都有接触的组织,携带着有关机体的大量宝贵信息。在理论上,检测血液携带的 DNA、RNA、囊泡和细胞残骸可以帮助人们诊断和监控各种疾病。
通过检测血液样本中的基因表达、基因变异等信息,可以为诊断和治疗提供更为精准的数据支持。基因检测技术的应用已经渗透到多个领域,例如癌症筛查、遗传性疾病的检测和预测、个体化用药,以及肿瘤微转录组分析等。
RNA的提取之难
高质量的全血RNA可满足多种生物学下游实验的研究需求。但由于血液离体后血细胞内的RNA不稳定,采血后极易降解。同时广泛分布的RNase时刻发挥着降解RNA的功能,其活性难以被抑制,因此使得从全血中提取RNA困难重重:
01保存
如何保存临床检测所需的高质量样本,存在不少问题,许多临床收取的样本都会面临样本浓度过低、质量差的难题,这直接导致检测结果的合格率下降。
02提取
RNA提取条件较DNA严格,首先RNA的结构为单链状态,极其不稳定;且样品及环境中,存在大量的RNase,而RNase较耐高温,不易失活。因此在提取RNA时,需要避免内外源RNase的污染,这是保证RNA成功提取的关键所在。
全血保存方法
目前,针对全血样本的处理主要有以下四种保存方法:PAXgene保存、Trizol保存、速冻保存及RNAlater保存。其中,极力推荐PAXgene保存方法。
全血样本四种保存方式推荐系数:PAXgene保存、Trizol保存、速冻保存及RNAlater保存
PAXgene血液采集管系统可以收集全血,稳定核酸,将RNA降解风险降低到最少,为细胞内RNA的分析提供了准确可靠的数据。该采血管中添加了特殊的试剂,可以快速地保护细胞内的RNA,使其不被降解。
保存与运输
经PAXgene保存后的血液,在18~25℃可以保存3天,2~8℃可以保存5天,若试管要贮藏于低于-20℃的温度,先在-20℃冷冻24小时,然后再将其转移到-70℃或-80℃,可保存至少50个月。大体积干冰运输。
分离纯化
分离出纯净完整的RNA是进行基因表达分析及RNA结构功能研究的基础。
01
注意蛋白质的污染
纯RNA样品的A260/A280比值在1.8-2.1之间,如果低于1.8,表明存在蛋白质污染。RNA如果发生了降解,是不能用分光光度计检测到的。
02
防止RNA酶污染
1
RNA操作区应保持清洁,并定期进行消毒。
2
操作过程中应自始至终佩戴抛弃式橡胶或乳胶手套,并经常更换,以避免将手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA酶带入试管或污染用具。
3
尽量使用一次性枪头、离心管等塑料制品,尽量避免与其它实验共享器具,以防止交叉污染。
4
所有玻璃制品都必须在240℃烘烤4小时。所有旧塑料制品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟,并用DEPC-H2O彻底冲洗后灭菌,也可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。
凡知自动化全血总RNA提取
全血直提,解放双手
全血总RNA提取试剂盒(磁珠法)
【货号】FG1101R-02
下游应用
提取产物可直接用于qPCR、Northern Blot、二代测序建库和分子克隆等下游实验。
产品特点
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操作简单快速、效率高 -
质量稳定可靠、得率高 -
易于自动化、通量高 -
不使用苯酚/氯仿等有机试剂、安全性高 -
样本需求量少,对于微量样本有绝对优势
良好的开端等于成功的一半,与手工法提取相比,自动化提取血液RNA操作更加简便、快速,可有效减少手工提取的操作失误,同时最大程度的降低外源性RNase的污染,确保所提RNA产物的质量和纯度。
如果您对我们的产品感兴趣,欢迎随时联系我们当地销售,或致电400-002- 2772,我们将为您提供全面有效的解决方案。
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