试用 | 快!简!好!革兰氏阳性菌提取难?一盒解决提取烦恼!

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细菌DNA提取是实验室常做的实验之一。根据细胞壁结构和染色性能不同,细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。其中,革兰氏阳性菌的细胞壁由于具有较厚的肽聚糖结构,一般的细菌DNA提取试剂盒难以将其彻底裂解,提取得率往往不高。
 
 

 

革兰氏阳性菌细胞壁结构

 

革兰氏阳性菌特征

革兰氏阳性细菌的主要特征是它们的结构。一般有以下特点:
  • 没有外膜。革兰氏阳性细菌没有外膜,但革兰氏阴性细菌有。
  • 复杂的细胞壁。包围细胞质膜的细胞壁由肽聚糖、多糖、磷壁和蛋白质组成。它很容易吸收外来物质。
  • 厚的肽聚糖层。在革兰氏阳性细菌中,肽聚糖有40到80层厚。
  • 某些表面附属物。有些革兰氏阳性菌有鞭毛,可以帮助它们移动。它们很少有被称为菌毛的毛发状结构。

 
 
 
裂解方法
 
 

 

由于革兰氏阳性菌特殊的细胞壁结构,难以裂解,因此在其核酸提取方面,效果一直不很理想。目前,革兰氏阳性菌的核酸提取主要采用裂解细胞后提取核酸的方法,其中常用的裂解方法主要包括:超声法、研磨法以及酶解法等。

 

1.超声法:使用超声波细胞破碎仪。原理是利用超声产生的热效应、空化效应和机械效应破菌,同时超声过程产生的漩涡对菌体也有剪切力,有助于破菌。

 

2.研磨法:可用的研磨剂有氧化铝、玻璃珠、玻璃粉等。可以手动在研钵里磨,也可以使用研磨机机器进行研磨。原理是:在悬液中加入研磨材料,研磨时研磨颗粒碰撞而破碎细胞。

 

3. 酶解法:革兰氏阳性菌细胞壁较厚,肽聚糖含量丰富,对溶菌酶较敏感。提取试剂盒中含溶菌酶,可以消化肽聚糖,去除细胞壁,留下细胞部分采用另一种裂解方式,方法灵活,避免了一些由机械裂解产生的破坏。

 

三种裂解方法优劣势对比
 
 
 
核酸纯化方法
 
 
细胞壁成功裂解后,需要经过核酸纯化,才能得到高质量、高纯度的DNA。目前,核酸纯化常使用柱式法和磁珠法,并被广泛应用。

 

柱式提取法与磁珠法的比较
 

针对革兰氏阳性菌提取困难的特点,凡知医学的革兰氏阳性菌/真菌DNA提取试剂盒(磁珠法)将物理机械法和化学法相结合,可更好更快地处理对于难破壁的细菌样本,提高提取效率,经该试剂盒提取的DNA基因组可用于酶切、文库构建、分子克隆、PCR、RT-PCR、高通量测序等多种分子生物学实验。

 

革兰氏阳性菌/真菌DNA

提取试剂盒(磁珠法)

 

 
产品介绍
 

本产品采用自主研发的磁珠纯化技术和独特的缓冲液体系,以及利用物理破碎与酶学消化相结合的裂解方法,使核酸大量释放,显著提高核酸提取回收率,有效避免因破壁不充分引发的假阴性结果。本产品专注于各种微生物基因组DNA的快速分离纯化,例如革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、非典型菌、真菌等。

 

产品优势

 

  • 质量高产:提取DNA的产量高、完整性好,浓度可达20~100ng/μl
  • 适用广泛:支持各类细菌及真菌样本,包括难裂解的革兰氏阳性菌、结核分枝杆菌、酵母等。
  • 场景灵活:既可支持手动提取,又可高效的与液体工作站或全自动核酸提取仪配套使用,以进行快速、大样本量的提取,提升整体效率。
  • 过程安全:提取过程安全,不涉及有毒的酚、氯仿、β-巯基乙醇等有机溶剂。

 

实验数据

 

利用本产品及A厂家试剂盒分别对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)进行DNA提取,结果显示:本产品提取的DNA优于A厂家的产品,可较大限度地去除RNA、蛋白、脂类及其他杂质,提取DNA的纯度高、完整性好。

凡知试剂盒与美国A公司试剂盒结果对比展示

 
 
 

凡知医学的革兰氏阳性菌/真菌DNA提取试剂盒(磁珠法),无需溶菌酶孵育,操作简便,提取的DNA纯度更高。兼容市面上的主流高通量自动化核酸提取仪,或搭配凡知医学的全自动核酸提取仪效率更高,一步加样,自动完成所有试验流程,结果更加稳定可靠。

 
 
 
 
 

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2024年11月19日 11:16
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