灵敏度高 特异性强——凡知FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒上线!

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我们知道DNA分子实验,实验前需要对DNA进行定量,以投入适量的DNA,才能得到满意的实验结果。但是看似简单的DNA定量,由于DNA质量参差不齐,如浓度过低,纯度不够,导致定量不准确,进而影响实验的结果。

 

 

核酸质控作为分子生物学最基础的实验之一,核酸定量的准确与否直接决定着下游实验的结果。核酸定量是分子生物学和遗传学研究中的关键步骤,用于确定DNA和RNA的含量。以下是几种主流的核酸定量方法:
 

01

紫外吸收法

原理:利用核酸分子中碱基的芳香环结构在紫外光区吸收特性进行定量。
优点:操作简便、快速,灵敏度高。
缺点:无法区分DNA和RNA,易受降解核酸、游离核苷酸及其他杂质的干扰。

02

荧光染料法

原理:使用特异性荧光染料与核酸分子结合后产生的荧光信号进行定量。
优点:灵敏度高,可检测到极低浓度的核酸;特异性好,能区分DNA和RNA;且不易受杂质干扰。
缺点:操作过程相对复杂,需特定试剂和仪器;荧光染料价格较高。

03

荧光定量法

原理:在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针进行实时荧光监测的方法。随着PCR反应的进行,荧光信号不断积累并达到某一阈值(CT值),该CT值与起始模板浓度的对数存在线性反比关系。通过测定CT值并结合已知浓度的标准品建立的标准曲线可计算出待测样品的核酸浓度。
优点:特异性强、灵敏度高、可定量范围广;且能实现自动化操作和高通量检测。

缺点:操作复杂且需特定仪器和试剂;成本较高且易受实验条件影响。

表1.核酸定量主流方法比较

 
 
 
 
不同的方法各有优势,互相配合。针对常规核酸样本初步定量浓度纯度和是否存在污染物等信息可选择吸光度法定量,Qubit定量更适合低浓度的珍贵样品或需要精确定量的下游实验,如二代测序、荧光定量PCR等。
 
 
 
 

 

凡知医学
 
FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒
 
 
 
 
产品介绍
 

FireQubit dsDNA HS Assay Kit是一种简便快速、灵敏、准确度高的双链DNA(dsDNA) 荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含荧光检测试剂、标准品和缓冲液,对dsDNA有高度选择性,RNA干扰小,对于dsDNA样本在0.1-100ng之间有良好的线性关系,相比于传统的紫外检测(A260)方法,可更精确地对DNA进行定量,免除其它物质的干扰,可准确测定dsDNA浓度,提高实验的准确性。

 

本试剂盒操作简单,可使用荧光酶标仪或Qubit仪器进行检测。针对酶标仪高通量检测模式,特别包含了5个点的标准品,能使定量结果更加准确。

 

 
 
 
 
产品应用
 

可以对浓度为100pg/µL-100ng/µL的dsDNA样品进行精确定量。

 

 
 
 
 
产品优势
 
灵敏度高:可以对浓度为100pg/µL- 100ng/µLdsDNA样品进行精确定量。
特异性强:只结合dsDNA,特异性强,不受RNA的影响,并且对一些常规的污染物,如盐、游离的核苷酸、蛋白质、溶剂、去污剂等都具有极好的耐受性。
耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR 扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
操作简便性:操作简单,将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液,然后加入待测dsDNA 样品,通过Qubit®荧光仪进行检测,此操作在室温下即可进行。

定量更精确:在ssDNA、RNA和单体核苷酸存在的条件下,可以选择性地检测低至100 pg/µL的dsDNA。

 

 
 
 
 
案例展示
 

图1:FireQubit dsDNA HS Assay Kit测试结果

针对9个经过标准品系列梯度稀释的不同浓度(10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、0.0781、0 ng/ μL)的dsDNA样本用FireQubit试剂进行检测,结果如图所示:dsDNA 样本在0-100 ng区间具有良好的线性关系,并且样本重复性较好。

 

图2:污染物对dsDNA定量检测试剂盒的影响

 

如图所示:将凡知FireQubit dsDNA高灵敏检测试剂盒应用于存在高浓度污染物的样本中定量dsDNA,结果表现优异,抗污染能力强

 

 

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2024年10月12日 10:24
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