全血DNA提取遇到问题很难搞？不妨试试调整这些方向

真核细胞高分子量DNA提取质量是影响后续实验重要因素，尤其在基因分型试验中，模板DNA高质量是后期实验结果准确重要保证，速度的快慢和操作是否简单亦为多数实验室考虑的主要因素，得到高纯完整的全血基因组DNA可用于科研、临床、PCR实验室快速分析要求。

全血DNA提取是一种常用的实验技术，旨在从人体全血样本中分离纯净的 DNA。全血DNA提取的原理主要包括以下几个步骤。

图1：全血血浆、白细胞、血小板、红细胞组分及所在位

图2：提取液中的DNA、大量蛋白、RNA、盐类、微量血红素

使用3种常用方法提取各保存时长的全血标本，比较DNA的浓度和纯度，探讨3种方法的适应范围，为实验室DNA提取方法的选择提供参考。

全自动磁珠法、手工离心柱法和异丙醇沉淀法。

• DNA浓度的均值：异丙醇沉淀法优于自动磁珠法优于手工离心柱法。

• DNA浓度的稳定性：全自动磁珠法优于手工离心柱法优于手工沉淀法。

3种方法提取的DNA纯度均符合分子生物学标准要求。

DNA质量是进行下一步实验的关键，DNA提取有两个基本原则：保证DNA结构的纯度和完整性。

• A260/280 >2.1 RNA污染;
• A260/280  一般在1.8-2.1，DNA提纯效果好;
• A260/280 <1.8 盐、无机物污染;
• A260/230 >2.0 DNA提纯效果较好;

• A260/230 <2.0 存在盐离子、多肽、碳水化合物等污染。

根据实验需要提取的DNA样品应作分装处理，近期实验用少量DNA样品冻存于20℃冰箱中，其余样品冻存于-80℃低温冰箱；DNA样品切忌反复冻融,若DNA样品长期存放于-20℃环境或实验过程中反复多次冻融，则易发生降解，从而造成PCR扩增后产物在电泳时产生涂抹条带或者没有条带，或阳性检出率降低等结果。

提取DNA的全血需用EDTA抗凝，保存的用量为2mL或以上，运输过程中应避免采血管反复颠倒和（或）强力震荡等，以免发生溶血；取回的全血4℃保存待用，一般存放时间不宜超过24h，以免影响DNA的提取；如需长期保存，可将其保存于-80℃低温冰箱中（经低温保存后的全血提取DNA需要较长的操作时间）全血在保存过程中应避免反复冻融。

DNA提取过程中，操作人员需穿戴实验服、口罩和手套，实验所需枪头、EP管等实验耗材需经高压灭菌消毒，并提前预热水浴锅和恒温箱。

血清分离时,操作人员动作要缓慢,操作时尽可能抽净上层血清,保留中间层的白细胞和下层的红细胞,初学者操作时不可过分追求吸净上层血清,以免将中间的白细胞层吸走而影响DNA提取。

在实验操作过程中，使用移液器吸取试剂时不要把移液器枪头伸入液体过多，以刚刚没入液面为宜,保证能吸到液体即可，避免造成浪费。PCR实验精度较高，加入试剂量多为微升计，如移液器枪头伸入试剂过多，粘附于枪头的试剂就会较多，会导致实验试剂的极大浪费。

凡知

 

 全血DNA提取试剂盒（磁珠法）

 

本产品采用自主研发的磁珠纯化技术和独特的缓冲液系统，适用于从抗凝血液、浓缩血液、白膜层等生物样品中提取基因组DNA，为从人类以及哺乳动物的血液提取基因组DNA提供了一种简单、快速、高效的方法。

 

产品应用：

适用于多种分子生物学实验，包括酶切、文库构建、Southern杂交、分子克隆、PCR、RT-PCR、 芯片检测、高通量测序等下游实验。

 

产品优势：

高纯度：利用特异性纳米级超顺磁性微球进行分离纯化基因组DNA，提取的核酸纯度好、得率高。

高效率：短时间内即可获得超纯的基因组DNA，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

高安全：提取过程不需要用到有毒的酚、氯仿、β-巯基乙醇等有机溶剂。

高通量：可高效的与液体工作站或全自动核酸提取仪配套使用，提升整体效率。

 

案例展示：

竞品比较结果

提取样本：在-20℃冻存3个月的200µL EDTA全血样本。

参考资料：

[1]陈丽霞,张振昶,谢小冬,等.3种提取全血基因组DNA的方法比较[J].基因组学与应用生物学,2014,33(05):1110-1113.DOI:10.13417/j.gab.033.001110.

[2]尹相林,展秀君,沈萍,等.人外周血DNA提取方法比较[J].黑龙江医药科学,2014,37(06):47-48.

[3]王秀娟,肖瑞,张传领,等.血液基因组DNA提取试剂盒提取条件的优化[J].疾病监测与控制,2015,9(12):855-857.