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简单三步，轻松完成组织石蜡切片(FFPE) RNA高效提取！

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石蜡切片


石蜡切片（paraffin section）是组织学常规制片技术中应用最为广泛的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。


凡知医学的石蜡包埋组织RNA提取试剂盒（磁珠法）可从福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 的组织标本中分离高质量的RNA，旨在为客户提供一种简单、可靠、快速的方法。通过脱蜡剂去除组织石蜡切片中的石蜡，蛋白酶K消化与核酸结合的组蛋白，使DNA和RNA从石蜡组织中裂解释放，DNase去除核酸中的DNA，最后磁珠吸附获取纯净的RNA。


一.样品处理




石蜡包埋组织的存在方式不同，需采用不同的样本处理方法，以减少样品损耗或者降低RNA降解。若为组织石蜡块，需要先将修整好的蜡块置于石蜡切片机上进行切片，按照需求切不同厚度样品，并置于离心管；若为新鲜蜡卷可直接置于离心管中；若切片已裱在载玻片上，可用锋利单面刀片刮下后置于离心管中。


二.提取流程






1.去除石蜡


由于组织石蜡切片的特殊性，石蜡可以阻碍消化液对组织的渗透，因此，对组织石蜡切片进行彻底的脱蜡非常重要。传统的脱蜡方式为二甲苯脱蜡，二甲苯脱蜡不仅容易造成核酸片段化和得率低，而且对人有毒害，切片越厚或存放时间越长，脱蜡效果越差。


石蜡包埋组织RNA提取试剂盒（磁珠法）采用无毒、操作简单、可高效快速溶解蜡块的脱蜡剂，无二甲苯脱蜡，待蜡块溶解后，吸弃上层的蜡相，保证脱蜡彻底。蜡块全程处理时间只需要100s，减少了RNA降解的风险，保证RNA的含量和完整性。

组织石蜡切片中加入脱蜡剂后上层的蜡相




2.RNA提取


（1）解交联


石蜡是一种软质材料，在切片时可能会变形或损坏。因此，在石蜡包埋组织制备的过程中，为了使蜡更加牢固，保持切片完整，实验中常常使用加热、紫外线辐射或化学处理等不同方法，从而导致了石蜡分子之间的交联。


当发生交联时，组织石蜡切片中的DNA分子会彼此交联，并与RNA和蛋白质分子交联。因此，想要提取完整的RNA需要将逆转交联，以帮助RNA从交联中释放出来，也即解交联。

组织石蜡切片固定对DNA、RNA和蛋白的影响


石蜡包埋组织RNA提取试剂盒（磁珠法）在RNA提取过程中通过先加入蛋白酶K消化与核酸结合的组蛋白，释放交联中的DNA和RNA核酸分子；加入DNase去除核酸中的DNA，最后得到纯净的RNA分子。另外，通过80℃高温也可以起到解开交联的作用。

（2）RNA纯化

石蜡包埋组织RNA提取试剂盒（磁珠法）通过进一步纯化，洗去蛋白和盐离子。


另外，使用特异性磁珠可吸附RNA，通过结合、洗涤、洗脱等过程获取纯化核酸。
RNA提取纯化流程图解

三.RNA质量检测




通过 Agilent 2100生物分析仪检测显示，RNA完整性较好的样本，5s、18s及28s峰图良好。

石蜡包埋组织RNA峰图结果展示

四.提取注意事项




1.在制备RNA样品过程中需避免RNase污染，因此实验器具和试剂需是RNase-free，手套、口罩要勤更换。
2.观察脱蜡后形成的组织沉淀是否很紧实，如果异常，重复脱蜡。
3.储存提取好的RNA时应该在-80℃下保存，并避免重复冻融，以确保其稳定性和长期保存。


2023年9月11日 17:48
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