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RNA提取“神器”盘点！总有一款能成为你的实验“搭子

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在分子生物学实验中，获取高纯度且结构完整的RNA至关重要，它是开展RT-PCR、Northern杂交、mRNA分离、cDNA合成及体外翻译等多项实验的基础。

RNA提取实验看着简单但好像常常让研究人员为难。由于RNA是单链结构，且生活环境中RNA酶无处不在，导致RNA极其容易降解，很多时候历经繁琐步骤操提取出的RNA，却最终在电泳图上呈现一片模糊的弥散，真的非常让人沮丧。

RNA提取类型

1.总RNA提取

总RNA中，75-85%为rRNA（主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA），其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA（small nuclear RNA，snRNA）及核仁小分子RNA（small nuceolar RNA，snoRNA）等组成。

2. miRNA提取

MicroRNAs（miRNAs）是小型的、高度保守的RNA分子，如小干扰RNAs（siRNAs），通过与他们的碱基配对调节其同源mRNA的分子表达，以预防通过各种机制的表达。他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构。

RNA提取的基本原理

RNA提取的基本原理是利用化学试剂将RNA从细胞或组织中分离出来，RNA的分离过程需要破坏细胞膜和核壁，使RNA从细胞中释放出来。此外，还需要去除DNA、蛋白质等杂质，使提取到的RNA纯度尽可能高。具体方法多种多样，但核心步骤都包括：

1.细胞裂解: 使用裂解液破坏细胞膜和细胞核，释放出细胞内的RNA。裂解液的成分通常包括去污剂以及离液盐，以破坏细胞膜；盐类，以调节离子强度；以及RNA酶抑制剂，以防止RNA降解。

2.RNA分离: 利用RNA与其他细胞组分的差异，例如大小、电荷或亲和力，将其从裂解液中分离出来。常用的方法包括：

有机溶剂提取法：

利用酚/氯仿等有机溶剂，将RNA从水相中分离出来。该方法较为经典，但操作较为繁琐，且存在有机溶剂残留的风险。

吸附柱法：

利用硅胶膜或其他吸附材料，选择性地吸附RNA，然后通过洗涤步骤将RNA纯化。这种方法提取率优于有机溶剂提取法，但需要反复离心，无法高通量操作，处理耗时较长。

磁珠法：

经表面修饰的磁珠在特定缓冲液条件下特异性吸附核酸，通过磁场分离和洗涤后，再洗脱得到纯核酸，易于自动化、高通量操作、安全无毒，结合提取仪能快速进行大量样本的核酸提取，广泛应用于分子生物学研究和临床诊断领域。

经验总结:

RNA研究的第一步为RNA提取，高质量的RNA是进行转录组测序、RT-PCR等试验的基础。

然而，由于RNA单链结构的不稳定性和无处不在的RNA酶，使得RNA在提取过程中容易发生降解。同时，传统方法面临多重障碍：操作步骤繁琐、耗时长，通常需要2-4小时才能完成；使用苯酚、氯仿等有毒有机试剂，危害实验人员健康；需要反复离心转移，增加样品损失和交叉污染风险；对操作技术要求高，稍有疏忽就会导致RNA降解。

因此，获得高质量的细胞RNA，选择合适、安全的提取产品非常重要！