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cfDNA丰度低、稳定性差？凡知医学磁珠法提取助力精准检测

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游离DNA（cell free DNA，cfDNA) 是指位于细胞外并可以在体液中检测到的DNA片段，长度大约低于200bp，分子量低，浓度低，主要存在于全血的无细胞成分中，如血浆和血清，以及其他人体液体，如尿液、脑脊液、唾液等。

目前，cfDNA作为液体活检的主要检测对象，已被广泛应用于肿瘤个性化治疗、产前诊断、自身免疫性疾病检测以及器官移植的研究中。由于cfDNA在血液中的浓度极低、片段短、降解快，常规核酸提取方法的效率较低，具有一定的技术难度。因此，提取高质量的cfDNA样本是获取结果准确性的重要前提。

PART.1

cfNA提取难点

血浆中游离DNA含量较低

血浆中游离DNA的含量通常较少，约占总DNA的一小部分。因此，在提取过程中需要使用敏感的技术和方法来获取足够的DNA量。

cfDNA片段短小

cfDNA片段长度较短，通常在160-180bp左右，且呈现出明显的片段化特征。这些短片段在提取过程中容易受到物理和化学因素的影响而断裂或者降解。

纯度低

血浆中有丰富的蛋白、盐类等杂质，加上提取试剂中也有很多化学成分，导致提取的cfDNA纯度不高，又很大可能影响下游实验。

基因组污染

如果采血后不及时分离，血细胞可能破裂，导致基因组DNA污染cfDNA，影响下游cfDNA检测。

采血管中保存液的干扰

随着专门用于cfDNA保存的采血管在临床上的大量使用，采血管中保存液成分也会干扰cfDNA的提取。

PART.2

如何获取高质量cfDNA

cfDNA核酸提取方法对比

能否获得高质量的cfDNA直接关系到下游检测试验的成败。目前离心柱法和磁珠法是两种常见的核酸提取方法，各有长短，详细对比如下：

方法	离心柱法	磁珠法
原理	使用特殊硅基材料高盐酸性缓冲液中特异性吸附核酸，去除杂质，低盐碱性缓冲液中洗脱核酸	吸附核酸后的复合磁性微球，在外加磁场作用下从溶液中快速分离，从而达到核酸纯化的作用
劣势	耗费样品多，需反复离心，不便高通量无法应对突发疫情基因诊断等	部分自动化仪器程序封闭
优势	操作难度低，可处理样本类型多，纯度较高	安全无毒，处理简单，提取质量高，适用高通量样品处理和自动化

表1：cfDNA核酸提取方法对比

正常情况下cfDNA在体液中的丰度低，有效获取血液中微量的cfDNA是目前cfDNA分析的主要障碍。目前，磁珠法是应用最广泛的cfDNA提取方法，其特异性吸附属性，可针对血清、血浆样本中短片段游离DNA进行定向富集，具有纯度高、回收率高、自动化程度高的优势，可适配自动化提取仪进行自动化提取、提取产量高等特点受到大家的喜爱。

针对cfDNA各种提取难题，凡知医学推出的血浆游离DNA提取试剂盒（磁珠法）采用自主研发的磁珠纯化技术和独特的缓冲液系统，针对血清、血浆和羊水等样本中短片段游离DNA进行特定富集，有效实现游离DNA高回收效率，实验操作简便，既可支持手动提取，又可高效地与液体工作站或全自动核酸提取仪配套使用，以进行快速、大样本量的提取，提升整体效率，助力精准检测。